超聲細(xì)菌分散計(jì)數(shù)儀助力結(jié)核桿菌藥敏試驗(yàn)

一、背景介紹

結(jié)核分枝桿菌耐藥性的產(chǎn)生及其引起的耐藥結(jié)核病的流行，已經(jīng)成為國內(nèi)外高度關(guān)注的嚴(yán)重影響結(jié)核病防治效果的問題。開展藥物敏感性試驗(yàn)和耐藥性監(jiān)測，對了解結(jié)核分枝桿菌的耐藥狀況、指導(dǎo)臨床治療、以及研究耐藥發(fā)生機(jī)制、有效控制耐藥結(jié)核病的流行具有非常重要的意義。

體外抗菌藥物敏感性試驗(yàn)簡稱藥敏試驗(yàn)（AST），是指在體外測定藥物抑菌或殺菌能力的試驗(yàn)。藥敏實(shí)驗(yàn)可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌藥的敏感性，其目的是了解病原微生物對各種抗生素的敏感程度，以指導(dǎo)臨床合理選用抗生素藥物的微生物學(xué)試驗(yàn)。

固體培養(yǎng)法這是目前結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室常用的細(xì)菌學(xué)藥敏試驗(yàn)方法，包括比例法( method of proportion，MOP) 和絕對濃度法，分別由法國學(xué)者G．Canetti 和德國學(xué)者G．Meissner 于1963 年首先提出。比例法是世界衛(wèi)生組織推薦的藥敏試驗(yàn)方法，也是目前我國流行病學(xué)監(jiān)測和耐多藥結(jié)核病規(guī)劃管理項(xiàng)目所采取的方法。比例法是將結(jié)核分枝桿菌菌液稀釋成不同的濃度，接種在相同濃度的含藥羅氏培養(yǎng)基上，通過計(jì)算耐藥菌的比例，來判斷細(xì)菌是否耐藥。

在我國，各省、直轄市、自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心及胸科/傳染病醫(yī)院是開展結(jié)核病研究和藥敏試驗(yàn)的主要單位。收集培養(yǎng)的結(jié)核桿菌樣本，要進(jìn)行后續(xù)的藥敏試驗(yàn)，細(xì)菌樣品的分散尤為關(guān)鍵。傳統(tǒng)方法通常是通過挑取培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行研磨分散，反復(fù)加液比濁，直至將所有的樣本均調(diào)節(jié)到同一麥?zhǔn)蠞岫?，然后進(jìn)行后續(xù)的藥敏試驗(yàn)。

超聲細(xì)菌分散計(jì)數(shù)儀是一款基于超聲分散和光電濁度檢測原理的菌液前處理儀器。該儀器與傳統(tǒng)的手工分散方法相比，它能更快更好地實(shí)現(xiàn)菌落分散和濁度檢測一體化，同時(shí)智能提示稀釋到標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)蠞岫染鷳乙核璧南♂岓w積。是一款高效率解放雙手的同時(shí)還不影響菌株活性和藥敏試驗(yàn)結(jié)果的智能儀器，在微生物實(shí)驗(yàn)前處理中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

二、超聲分散處理結(jié)核桿菌的優(yōu)點(diǎn)

1. 工作原理

通過壓電陶瓷換能器將高頻電能轉(zhuǎn)化為超聲波聲能，由超聲波擊錘將超聲波聲能傳遞到比色皿，在不損傷樣品的前提下，實(shí)現(xiàn)比色皿中成團(tuán)細(xì)菌的超聲波均勻分散，然后光源產(chǎn)生的光線透過比色皿照在傳感器上，通過傳感器讀取透射光的強(qiáng)度，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對比，實(shí)現(xiàn)樣品麥?zhǔn)蠞岫葴y量，并基于樣品麥?zhǔn)蠞岫群退惴ńo出稀釋到目標(biāo)濁度所需加液體積，并對樣品菌落數(shù)進(jìn)行初步估計(jì)。

2. 菌液制備過程對比

序號(hào)	超聲分散	研磨瓶分散
1	參數(shù)設(shè)置（0.5min）	/
2	細(xì)菌挑?。?min）	細(xì)菌挑?。?min）
3	超聲分散、比濁（1-3min）	漩渦震蕩、研磨（1-2min）
4		菌液靜置，轉(zhuǎn)移到比濁管（15min）
5		添加生理鹽水比濁（2min）
6	根據(jù)稀釋體積提示添加生理鹽水（0.5min），制備出標(biāo)準(zhǔn)濁度菌懸液	反復(fù)加液，比濁（2-5min），制備出標(biāo)準(zhǔn)濁度菌懸液
總耗時(shí)	3-5min	23-27min